Huile pure de Saposhnikovia divaricata pour la fabrication de bougies et de savon huile essentielle de diffuseur en gros nouveau pour diffuseurs de brûleurs à roseaux

Huile pure de Saposhnikovia divaricata pour la fabrication de bougies et de savon, huile essentielle de diffuseur en gros, nouvelle pour diffuseurs de brûleurs à roseau Image en vedette

breve descrizzione:

2.1. Preparazione di SDE

I rizomi di SD sò stati acquistati cum'è una erba secca da Hanherb Co. (Guri, Corea). I materiali vegetali sò stati cunfirmati tassonomichi da u duttore Go-Ya Choi di l'Istitutu Coreanu di Medicina Orientale (KIOM). Un specimenu di voucher (numeru 2014 SDE-6) hè statu dipositu in l'Erbariu Coreanu di Risorse Herbali Standard. I rizomi secchi di SD (320 g) sò stati estratti duie volte cù 70% etanol (cun un reflux di 2 h) è l'estrattu hè stata cuncentrata sottu pressione ridutta. A decocuzione hè stata filtrata, liofilizzata è conservata à 4 ° C. U rendimentu di l'estrattu seccu da i materiali di partenza crudi era 48,13% (w / w).

2.2. Analisi quantitativa di cromatografia liquida d'altu rendiment (HPLC).

L'analisi cromatografica hè stata realizata cù un sistema HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) è un detector di fotodiode. Per l'analisi HPLC di SDE, u primuOU standard -glucosylcimifugin hè statu acquistatu da l'Istitutu di Promozione di Corea per l'Industria di Medicina Tradizionale (Gyeongsan, Corea), èsec-O-glucosylhamaudol è 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol sò stati isolati in u nostru laboratoriu è identificatu da analisi spettrali, principalmente da RMN è MS.

I campioni SDE (0,1 mg) sò stati dissolti in 70% etanol (10 mL). A separazione cromatografica hè stata fatta cù una colonna XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). A fase mobile consistia di l'acetonitrile (A) è l'acidu acìticu 0.1% in l'acqua (B) à un flussu di 1.0 mL / min. Un prugramma di gradiente multistep hè stata utilizata cum'è: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min), è 20-65% A (23-40 min). ). La lunghezza d'onda di rilevazione è stata scansionata a 210-400 nm e registrata a 254 nm. U voluminu di iniezione era 10,0μL. Soluzioni standard per a determinazione di trè cromoni sò stati preparati à una cuncentrazione finali di 7,781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), è 31,125 mg/mL (sec-O-glucosylhamaudol) in methanol è mantene à 4 ° C.

2.3. Valutazione di l'attività antiinflamatoriaIn vitro

2.3.1. Cultura di Cellule è Trattamentu di Campioni

E cellule RAW 264.7 sò state ottenute da a American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) è cultivate in mediu DMEM chì cuntene 1% antibiotici è 5.5% FBS. I celi sò stati incubati in una atmosfera umidificata di 5% CO2 à 37 ° C. Per stimulà e cellule, u mediu hè statu rimpiazzatu cù mediu DMEM frescu, è lipopolisaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) à 1.μg/mL hè statu aghjuntu in presenza o assenza di SDE (200 o 400μg/mL) per 24 ore supplementari.

2.3.2. Determinazione di l'Ossidu Nitricu (NO), Prostaglandina E2 (PGE2), Fattore di Necrosi Tumorale-α(TNF-α), è Interleukin-6 (IL-6) Production

E cellule sò state trattate cù SDE è stimulate cù LPS per 24 h. A produzzione NO hè stata analizata per misurazione di nitriti cù u reattivu di Griess secondu un studiu precedente.12]. Secrezione di citochine infiammatorie PGE2, TNF-α, è IL-6 hè stata determinata utilizendu un kit ELISA (sistemi R&D) secondu l'istruzzioni di u fabricatore. L'effetti di SDE nantu à a produzzione di NO è di citochine sò stati determinati à 540 nm o 450 nm cù un Wallac EnVision.™lettore di micropiastre (PerkinElmer).

2.4. Evaluazione di l'attività antiosteoartriteIn Vivo

2.4.1. Animali

I ratti maschili Sprague-Dawley (7 settimane d'età) sò stati acquistati da Samtako Inc. (Osan, Corea) è allughjati in cundizioni cuntrullate cù un ciclu di luce / bughju di 12 ore à°C è% umidità. I rati sò stati furniti cù una dieta di laboratoriu è acquaad libitum. Tutti i prucessi sperimentali sò stati realizati in cunfurmità cù e linee di l'Istituti Naziunali di Salute (NIH) è appruvati da u Cumitatu di Cura è Uso di l'Animali di l'Università di Daejeon (Daejeon, repubblica di Corea).

2.4.2. Induzione di OA cù MIA in Rats

L'animali sò stati randomizzati è assignati à gruppi di trattamentu prima di l'iniziu di u studiu (per gruppu). Soluzione di MIA (3 mg/50μL di 0.9% saline) hè stata direttamente injected in u spaziu intra-articular di u ghjinochju drittu sottu anestesia indotta cù una mistura di ketamina è xilazina. I ratti sò stati divisi aleatoriamente in quattru gruppi: (1) u gruppu salinu senza iniezione MIA, (2) u gruppu MIA cù iniezione MIA, (3) u gruppu trattatu SDE (200 mg / kg) cù iniezione MIA, è (4) ) u gruppu trattatu indometacin- (IM-) (2 mg / kg) cù iniezione MIA. I rati sò stati amministrati per via orale cù SDE è IM 1 settimana prima di l'iniezione di MIA per 4 settimane. A dosa di SDE è IM utilizata in stu studiu hè stata basatu annantu à quelli impiegati in studii precedenti.10,13,14].

2.4.3. Misurazioni di a distribuzione di u pesu Hindpaw

Dopu à l'induzione di l'OA, u equilibriu originale in a capacità di pisà di i zampe posteriori hè statu disturbatu. Un tester d'incapacità (Linton instrumentation, Norfolk, UK) hè stata utilizata per valutà i cambiamenti in a tolleranza di u pesu. I rati sò stati cun cura posti in a camera di misurazione. A forza di pisazione esercitata da u membru posteriore hè stata mediata annantu à un periodu di 3 s. U rapportu di distribuzione di u pesu hè statu calculatu da l'equazioni seguenti: [pesu nantu à l'artru posteriore drittu / (pesu nantu à l'artru posteriore drittu + pesu nantu à l'artru posteriore manca)] × 100 [15].

2.4.4. Misurazioni di i Livelli di Citochine Serum

I campioni di sangue sò stati centrifugati à 1.500 g per 10 min à 4 ° C; dopu u serum hè stata cullata è guardatu à -70 ° C finu à l'usu. I livelli di IL-1β, IL-6, TNF-α, è PGE2 in u serum sò stati misurati cù kits ELISA da R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) secondu l'istruzzioni di u fabricatore.

2.4.5. Analisi RT-PCR quantitativa in tempu reale

L'RNA tutale hè stata estratta da u tissutu di l'articulazione di u ghjinochju cù u TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), trascritta inversamente in cDNA è amplificata per PCR cù un kit TM One Step RT PCR cù SYBR green (Applied Biosystems). , Grand Island, NY, USA). A PCR quantitativa in tempu reale hè stata realizata cù u sistema Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). E sequenze di primer è a sequenza di sonda sò mostrati in a Tabella1. Aliquote di cDNA di campionu è una quantità uguale di cDNA GAPDH sò stati amplificati cù a mistura maestra TaqMan® Universal PCR chì cuntene DNA polimerasi secondu l'istruzzioni di u fabricatore (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). E cundizioni di PCR eranu 2 min à 50 ° C, 10 min à 94 ° C, 15 s à 95 ° C, è 1 min à 60 ° C per 40 cicli. A cuncentrazione di u gene di destinazione hè stata determinata utilizendu u metudu Ct comparativu (numberu di u ciculu di u sogliu à u puntu di croce trà a trama di amplificazione è u sogliu), secondu l'istruzzioni di u fabricatore.

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L'artrosi (OA) hè u disordine musculoskeletal più frequente è a malatia articular degenerativa più cumuna in l'anziani.1]. L'OA hè una cundizione causata in parte da ferita, perdita di struttura è funzione di cartilagine, è disregulazione di e vie proinflamatorii è antiinflamatorii.2,3]. Affetta principalmente u cartilagine articular è l'ossu subcondrale di l'articuli sinoviali è risultatu in fallimentu di l'articulazione, chì porta à u dulore nantu à u pesu, cumpresu à caminari è in piedi.4].

Ùn ci hè micca cura per l'OA, postu chì hè assai difficiuli di restaurà u cartilagine una volta chì hè distruttu.5]. L'ugettivi di u trattamentu sò di allevà u dulore, mantene o migliurà a mobilità di l'articuli, aumentà a forza di l'articuli, è minimizzà l'effetti disattivanti di a malatia. I trattamenti farmacològichi di l'OA anu u scopu di riduce u dolore per aumentà a funzione articulare di u paziente è a qualità di vita. Ancu se a distruzzione di cartilagine hè l'avvenimentu principale in l'OA, a degradazione di u collagene hè l'incidentu fundamentale chì determina a progressione irreversibile di l'OA in associazione cù a inflamazioni.6,7]. I trattamenti cù attività antiinflamatoria è chondroprotettiva sò previsti per alleviare u dolore è mantene l'integrità di a matrice in i pazienti OA.

Dunque, a diminuzione di a inflamazioni serà prubabilmente benefica in a gestione di l'OA. Studi recenti suggerenu roli protettivi per i risorsi di erbe nantu à a progressione di l'OA, in quantu à mitigà l'inflamazioni di i chondrocyte è a più distruzzione di cartilagine, per via di a so capacità d'interagisce cù i tessuti associati à l'articulazione, risultatu in a mitigazione di u dolore articular.8].

A radica diSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) hè statu largamente utilizatu in a medicina tradiziunale per u trattamentu di u mal di testa, u dolore, l'infiammazione è l'artrite in Corea è Cina.9,10]. I diversi effetti farmacològichi diSaposhnikovia divaricata(SD) includenu ancu proprietà antiinflamatorii, analgésiche, antipiretiche è antiartrite [9,11]. Un studiu recente hà dimustratu chì l'estrattu di cromone SD pussede effetti potenziali di l'artrite antireumatoide in un mudellu di mouse di l'artrite indotta da collagene.10]; in ogni modu, uni pochi di studii sò stati fatti per sustene l'attività anti-inflammatory è antiartrite diSaposhnikovia divaricataestratto (SDE).

Dunque, u presente studiu hà investigatu l'attività antiinflamatoria è antiosteoartrite di un estratto di etanolu di 70% di SD. Prima, l'effettu antiinflamatoriu di SDE hè statu evaluatuin vitroin cellule RAW 264.7 indotte da LPS. In seguitu, l'effettu antiosteoartrite di SDE hè statu misuratu da a valutazione di a distribuzione di pesu, a degradazione di u cartilagine articular, è e risposti inflammatorii in un mudellu di ratu di OA indotta da iodoacetate monosodico (MIA-).